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細(xì)胞的凍存方法:
1.細(xì)胞:選對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞,收集細(xì)胞24小時(shí)前換液一次。
2.計(jì)數(shù):按常規(guī)方法把細(xì)胞制成細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)。令細(xì)胞密度達(dá)5x106/ml,離心去上清吸入離心管中。
3.凍存液:先用培養(yǎng)液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO凍存液按上法-滴滴加入離心管中然后用吸管輕輕吹打令細(xì)胞重懸。
4.分裝:分裝入無菌安剖中每安剖加1.5毫升細(xì)胞懸液。
5.封口:用塑料安剖時(shí)擰緊瓶口即可;如用火焰封閉安剖口后仔細(xì)檢查定要封嚴(yán)必要時(shí)可浸入藍(lán)色液中觀察為安全起見把安剖縫入紗布小
袋中,以防液氮浸入后融解時(shí)因受熱發(fā)生爆炸傷人紗袋一端系以線繩 末端扎有小牌,注明細(xì)胞名稱:凍存日期以便日后查找。
細(xì)胞復(fù)蘇的方法:
1從液氮罐中取出安剖有時(shí)因安剖未封嚴(yán)浸入了液氮。取出后因安剖內(nèi)液氮迅速氣化而發(fā)生爆炸,因此應(yīng)帶有防護(hù)眼睛和手套。
2.迅速放入盛有36C-370水的搪瓷罐中扣上蓋并不時(shí)搖動(dòng)盡快解凍。
3.剪開紗布口袋取出安剖用70%酒精擦拭消毒后凈化臺(tái)上打開蓋,用吸管吸出細(xì)胞懸液裝入離心管中,再補(bǔ)加10m1培養(yǎng)液吹打使細(xì)胞懸
浮。
4.低速離心(500-1000轉(zhuǎn)分)5分鐘取上清后再重復(fù)用培養(yǎng)液漂洗、離心。

5.加入培養(yǎng)液適當(dāng)稀釋后,再移裝入培養(yǎng)瓶中,置溫箱培養(yǎng),次日更換一次培養(yǎng)液后再繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項(xiàng):
1.收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好。培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。
2.產(chǎn)品僅供科研先不開瓶蓋瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置數(shù)小時(shí)(4h左右).穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜。
3.靜置后鏡檢;拍照記錄細(xì)胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
4.貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞密度超過80%,可正常傳代:若未超過80%,收集細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代瓶蓋可稍微擰松。
5.細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗,可收集后4C保存?zhèn)溆?可補(bǔ)加2%血清。剛開始傳代時(shí)建議一半用細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基。一半用客戶自備的

培養(yǎng)基,使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件,以免因不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)狀態(tài)不佳。

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