一、樣品、試劑被污染，或加樣時(shí)操作不當(dāng)導(dǎo)致相鄰孔之間溶液濺灑出現(xiàn)交叉污染——更換試劑，小心操作。
二、酶標(biāo)板洗滌不好——洗板前先將抗體溶液倒干凈，然后清洗液倒?jié)M板孔，確保能充分洗滌。
三、抗體量過(guò)多導(dǎo)致非特異性結(jié)合——根據(jù)說(shuō)明書的推薦量使用抗體，稀釋抗體到適當(dāng)濃度。
一、抗體非特異性結(jié)合——應(yīng)確保板孔進(jìn)行了封閉并且使用的是恰當(dāng)?shù)姆忾]液以防止非特異性結(jié)合。
二、底物結(jié)合濃度過(guò)高——對(duì)底物進(jìn)行適當(dāng)稀釋。
三、反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)——當(dāng)酶標(biāo)板顯色足夠進(jìn)行吸光度讀數(shù)時(shí)立即使用終止液終止反應(yīng)，適當(dāng)縮短顯色時(shí)間。
四、底物溶液污染——正常底物溶液應(yīng)是澄清透明的，若出現(xiàn)黃色或其他顏色表明受到污染，應(yīng)更換新的底物溶液。
五、底物孵育過(guò)程沒(méi)有避光——底物孵育應(yīng)在避光條件下進(jìn)行。
一、樣品數(shù)量不整齊，加樣時(shí)間有長(zhǎng)有短——加重復(fù)孔時(shí)盡量保持加樣時(shí)間與第一次接近。
二、加樣量不一致——樣品稀釋前應(yīng)充分混勻，并且使用同一移液槍。
三、洗滌條件、操作人員不一致——重復(fù)測(cè)定樣品時(shí)，操作條件、人員應(yīng)盡可能與上次保持一致。
一、樣品中待測(cè)抗原含量太低會(huì)導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏低——可嘗試增加樣品使用量。
二、加入抗體量不合適會(huì)造成結(jié)果偏低或偏高——使用建議抗體量或?yàn)榱耸菇Y(jié)果更好盡可能調(diào)整抗體的適用量。
三、孵育時(shí)間太短導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏低——適當(dāng)延長(zhǎng)抗體或抗原的孵育時(shí)間，確保待測(cè)樣品與檢測(cè)抗體能充分結(jié)合。

四、孵育溫度不適合——應(yīng)保證抗體在最適宜條件下進(jìn)行孵育（一般37℃孵育1h）。